Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification

RT-LAMP eller Reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification er en ettrinns polymerasekjedereaksjonsmetode for å multiplisere spesifikke RNA-sekvenser. Den benyttes for å diagnostisere smittsomme sykdommer som er forårsaket av RNA-viruser.[1]

Den kombinerer loop-mediated isothermal amplification (LAMP)[2] DNA-deteksjon med revers transkriptase, for å lage cDNA fra RNA før reaksjonen blir foretatt.[3] RT-LAMP krever (til forskjell fra PCR) ikke noen PCR-maskin (Thermal cycler) og gjennomføres til en konstant temperatur på mellom 60 og 65 °C.

RT-LAMP benyttes for deteksjon av RNA-viruser (GroupS II, IV, og V etter Baltimore virusklassifiseringssystemet), som SARS-CoV-2-viruset[4][5] og Ebolaviruset [6]

I arbeidet mot covid-19 har japanske forskere ved sammenligning mellom RP-PCR-testing av asymptomatiske personer og den mindre alminnelig benyttede og mer RT-LAMP-testen i 2029 funnet at antallet positive og negative resultater var nokså like. De nasopharyngeale prøvene (RP-PCR) og spyttprøvene (RP-LAMP) klarte å detektere dem med infeksjonen i henholdsvis 77-93% og 83-97% av tilfellene. Begge testmetoder kunne også identifisere dem uten infeksjonen hos 99,9% av de smittede av de asumptotiske.[7] Dette er en høyere treffsikkerhet enn tiodligere antatt, og ettersom RT-LAMP er en reaskere gjennomførbart metode, og en metode der personen på egen hånd kan frembringe det som skal analyseres, mente forskere ved Hokkaido University at den kunne egne seg særlig godt i en rekke tilfeller, som ved massetesting, og også ved at den innebærer en minimal risiko for helsearbeiderne.

Referanser rediger

  1. ^ «Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): a rapid, accurate, and cost-effective diagnostic method for infectious diseases». J. Infect. Chemother. 15 (2): 62–9. 2009. PMC 7087713 . PMID 19396514. doi:10.1007/s10156-009-0669-9. 
  2. ^ Notomi, Tsugunori; Okayama, Hiroto; Masubuchi, Harumi; Yonekawa, Toshihiro; Watanabe, Keiko; Amino, Nobuyuki; Hase, Tetsu (15. juni 2000). «Loop-mediated isothermal amplification of DNA». Nucleic Acids Research. 28 (12): e63. PMC 102748 . PMID 10871386. doi:10.1093/nar/28.12.e63. 
  3. ^ «Applications of loop-mediated isothermal DNA amplification». Appl. Biochem. Biotechnol. 163 (7): 845–50. 2011. PMID 20844984. doi:10.1007/s12010-010-9088-8. 
  4. ^ Kellner, Max J.; Ross, James J.; Schnabl, Jakob; Dekens, Marcus P. S.; Heinen, Robert; Grishkovskaya, Irina; Bauer, Benedikt; Stadlmann, Johannes; Menéndez-Arias, Luis; Fritsche-Polanz, Robert; Traugott, Marianna (23. juli 2020). «A rapid, highly sensitive and open-access SARS-CoV-2 detection assay for laboratory and home testing». bioRxiv: 2020.06.23.166397. doi:10.1101/2020.06.23.166397. 
  5. ^ Lalli, Matthew A.; Langmade, S Joshua; Chen, Xuhua; Fronick, Catrina C.; Sawyer, Christopher S.; Burcea, Lauren C.; Wilkinson, Michael N.; Fulton, Robert S.; Heinz, Michael; Buchser, William J.; Head, Richard D.; Mitra, Robi D.; Milbrandt, Jeffrey (2020). «Rapid and extraction-free detection of SARS-CoV-2 from saliva with colorimetric LAMP». MedRxiv. PMC 7273276 . PMID 32511508. doi:10.1101/2020.05.07.20093542. 
  6. ^ Kurosaki, Yohei; Magassouba, N’Faly; Oloniniyi, Olamide K.; Cherif, Mahamoud S.; Sakabe, Saori; Takada, Ayato; Hirayama, Kenji; Yasuda, Jiro (22. februar 2016). «Development and Evaluation of Reverse Transcription-Loop-Mediated Isothermal Amplification (RT-LAMP) Assay Coupled with a Portable Device for Rapid Diagnosis of Ebola Virus Disease in Guinea». PLOS Neglected Tropical Diseases. 10 (2): e0004472. PMC 4764121 . PMID 26900929. doi:10.1371/journal.pntd.0004472. 
  7. ^ Hokkaido University: COVID-19: Saliva tests could detect the silent carriers 28. september 2020, lest 1. oktober 2020