Thespiai (gresk: Θεσπιαι, Thespiai) var en antikk gresk by i Boeotia. Den lå på flat mark med en rekke høyder som gikk østover fra foten av fjellet Helikon til Theben. Ifølge Pausanias var Eros den guddommen som ble mest tilbedt ved Thespiai.

Byen inneholdt mange kunstverk, blant dem Eros til Praxiteles, en av de mest kjente skulptørene i den antikke verden. Den trakk folkemengder til Thespiai. Senere ble den flyttet til Roma av Caligula, satt tilbake av Claudius og igjen flyttet av Nero. Der var også en bronsestatue av Eros av Lysippos. Thespiaierne tilbad også musene og feiret en festival til ære for dem i den hellige grotten på Helikon.

Rester av det som antagelig var den antikke festningen er der fremdeles, og de består av en avlang eller oval linje med befestninger. Området rett øst og sør for disse er dekket med grunnmurer, disse bærer vitner om utstrekningen til den antikke byen. Restene av en grav som inkluderte en kolossal steinløve ble i 1882 oppdaget på veien til Leuktra. Graven dateres til det 5. århundre f.Kr. og er antagelig graven til thespiaierne som falt i slaget ved Plataiai, for de som falt i slaget ved Thermopylene ble gravlagt i felten.

Historisk er Thespiai hovedsakelig en fiende av Theben. Under den persiske invasjonen i 480 f.Kr. var den en av de få byene i Boeotia som nektet å følge Thebens eksempel med å sende syv hundre menn med Leonidas I til Thermopylene. Etter at byen ble brent ned av Xerxes I, satte de resterende innbyggerne sammen en styrke på 1800 menn til den greske hæren ved Plataiai. Under den athenske invasjonen av Boeotia i 424 f.Kr., led den thespiaiske hæren tunge tap i slaget ved Delion, og året etter dro Theben fordel av den midlertidige svekkelsen til å anklage sine naboer for vennskap med Athen og fjerne deres murer. I 414 f.Kr. blandet de seg igjen inn for å slå ned et demokratisk opprør.

I korinterkrigen tok Thespiai Spartas side, og mellom 379 f.Kr. og 372 f.Kr. tjente de gjentatte ganger spartanerne som en base mot Theben. Året etter ble de redusert av Theben og tvunget til å sende en kontingent til slaget ved Leuktra. Det var antagelig kort tid etter dette slaget at Theben brukte sitt nye herredømme til å ødelegge Thespiai og fordrive dets folk til eksil. Byen ble gjenoppbygget noe senere. I 171 f.Kr. søkte byen Romas vennskap etter sin politikk med å stå imot Theben. Den blir senere nevnt av Strabo som et stort sted og av Plinius som en fri by.